NGHIÊN CỨU TINH SẠCH PROTEIN hnRNPK BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ

Abstract

hnRNPK là một protein liên kết DNA/RNA, tham gia vào các hoạt động liên kết axit nucleic và đóng vai trò quan trọng trong nhiều quá trình sinh học của tế bào. Do đó, những bất thường trong biểu hiện của protein hnRNPK có liên quan mật thiết đến sự phát triển của nhiều loại ung thư, làm nảy sinh nhu cầu biểu hiện và tinh sạch protein hnRNPK có chất lượng cao với số lượng đủ lớn để phục vụ các nghiên cứu về cấu trúc và chức năng của protein này. Tuy nhiên, sự không ổn định và hiện tượng kết tủa của protein hnRNPK trong quá trình tinh sạch là một trở ngại lớn đối với nghiên cứu. Để khắc phục vấn đề này, đề tài đã tối ưu hóa quy trình tinh sạch bằng cách sử dụng nồng độ muối KCl cao kết hợp với Green fluorescent protein (GFP) nhằm hỗ trợ quá trình tinh sạch. GFP là một công cụ hữu ích để theo dõi chất lượng protein trong quá trình tinh sạch, đồng thời nồng độ KCl cao trong các dung dịch đệm cũng giúp ngăn chặn hiện tượng kết tủa của protein hnRNPK. Kỹ thuật sắc ký ái lực Niken kết hợp với sắc ký lọc gel cho phép tách được protein hnRNPK với độ tinh sạch cao. Tuy nhiên, để phục vụ các nghiên cứu về cấu trúc và chức năng của protein hnRNPK, nồng độ KCl cuối cùng phải được hạ xuống mức muối sinh lý là 300 mM KCl. Ở nồng độ muối thấp này, sự ổn định của protein hnRNPK khó được duy trì, do đó trong tương lai cần kết hợp thêm các phương pháp khác nhằm hạn chế tối đa hiện tượng kết tủa của protein hnRNPK.